طرق تحليل الكروموسومات ؟

تحضير الكروموسوم يمكن استخدام أي نسيج به خلايا نواة حية تخضع للانقسام لدراسة الكروموسومات البشرية.

يتم استخدام الخلايا الليمفاوية المتداولة الأكثر شيوعًا من الدم المحيطي ، على الرغم من أنه يمكن تحضير عينات لتحليل الكروموسومات بسهولة نسبيًا باستخدام الجلد أو نخاع العظم أو الزغابات المشيمية أو خلايا السائل الأمنيوسي (الخلايا الأمنيوسية).

في حالة الدم المحيطي (الوريدي) ، تُضاف عينة إلى حجم صغير من وسط غذائي يحتوي على مادة phytohemagglutinin ، مما يحفز الخلايا اللمفاوية التائية على الانقسام.

تُزرع الخلايا في ظروف معقمة عند 37 درجة مئوية لمدة 3 أيام تقريبًا تنقسم خلالها ، ثم يضاف الكولشيسين إلى كل مزرعة.

يتمتع هذا الدواء بخاصية مفيدة للغاية تتمثل في منع تكوين المغزل ، وبالتالي إيقاف انقسام الخلية خلال الطور الاستوائي ، وهو الوقت الذي يتم فيه تكثيف الكروموسومات إلى أقصى حد وبالتالي يسهل رؤيتها.

ثم يضاف محلول ملحي منخفض التوتر ، مما يتسبب في تحلل خلايا الدم الحمراء وينتج عن ذلك انتشار الكروموسومات ، والتي يتم بعد ذلك تثبيتها وتثبيتها على شريحة وملطخة جاهزة للتحليل.

يمكن استخدام العديد من طرق التلوين المختلفة لتحديد الكروموسومات الفردية.  النطاقات G (giemsa) هذه هي الطريقة الأكثر استخدامًا.  يتم التعامل مع الكروموسومات بالتريبسين ، الذي يفسد محتواها من البروتين ، ثم يتم تلطيخها بصبغة ربط الحمض النووي المعروفة باسم جيمسا ، والتي تعطي كل كروموسوم نمطًا مميزًا من العصابات الفاتحة والداكنة.

(quinacrine) banding • هذا يعطي نمط نطاقات مشابه لذلك الذي تم الحصول عليه مع Giemsa ، ويتطلب فحص الكروموسومات باستخدام مجهر الأشعة فوق البنفسجية.

النطاقات R (العكسية) يتم تغيير الصبغيات بالحرارة قبل تلطيخها باستخدام Giemsa ، مما ينتج عنه نطاقات فاتحة ومظلمة والتي هي عكس تلك التي تم الحصول عليها باستخدام نطاق G التقليدي.

النطاقات C (الكروماتين المغاير المركزي) إذا تمت معالجة الكروموسومات مسبقًا بالحمض متبوعًا بالقلويات قبل النطاقات G ، فإن السنتروميرات والمناطق الأخرى غير المتجانسة التي تحتوي على تسلسلات DNA شديدة التكرار تكون ملطخة بشكل تفضيلي.

النطاق عالي الدقة يوفر النطاق G بشكل عام تحليلًا عالي الجودة للكروموسوم. توفر النطاقات عالية الدقة للكروموسومات في مرحلة مبكرة من الانقسام الفتيلي مثل الطور الأولي أو الطور المسبق حساسية أكبر ، ولكنها تتطلب الكثير من الناحية الفنية.

يتضمن ذلك أولاً تثبيط انقسام الخلايا بعامل مثل الميثوتريكسات أو الثيميدين. يضاف حمض الفوليك إلى وسط المزرعة ، والذي يطلق الخلايا في الانقسام.

ثم يضاف الكولشيسين في فترة زمنية محددة ، عندما تكون نسبة أعلى من الخلايا في مرحلة ما قبل الطور ولن تتقلص الكروموسومات بالكامل ، مما يعطي نمط نطاقات أكثر تفصيلاً.

● تحليل النوع KARYOTYPE • تتضمن المرحلة التالية في تحليل الكروموسوم أولاً حساب عدد الكروموسومات الموجودة في عدد محدد من الخلايا ، والتي يشار إليها أحيانًا باسم انتشار الطور الطوري. عادةً ما يتم تحديد العدد الإجمالي للكروموسوم في 10-15 خلية ، ولكن إذا كان هناك اشتباه في الفسيفساء ، فسيتم إجراء 30 أو أكثر من تعداد الخلايا.

يتم إجراء تحليل مفصل لنمط النطاقات للكروموسومات الفردية على كلا عضوين من كل زوج من المتماثلات في حوالي 3-5 حيزات طورية ، والتي تُظهر نطاقات عالية الجودة.

• إن نمط النطاقات لكل كروموسوم محدد ويمكن أن يظهر في شكل نمط نووي مثالي منمق يعرف باسم مخطط إيديوجرام.

• يقوم عالم الوراثة الخلوية بتحليل كل زوج من الكروموسومات المتجانسة ، إما أثناء النظر إلى أسفل المجهر أو ، بشكل متزايد ، على صورة انتشار الطور الطوري ، والتي يمكن الآن إنتاجها إلكترونيًا.

 

اترك تعليقاً