طرق تحليل الأحماض النووية ؟

تفاعل البلمرة المتسلسل • تُستخدم معلومات تسلسل الحمض النووي لتصميم اثنين من البادئات الأوليغنوكليوتيد (مكبرات الصوت) بطول 20 نقطة أساس تقريبًا مكملين لتسلسلات الحمض النووي التي تحيط بجزء الحمض النووي المستهدف.

• البادئات ، عند إضافتها إلى الحمض النووي المشوه ، سترتبط بتسلسلات الحمض النووي التكميلية التي ، مع عمل بوليميريز الحمض النووي ، ستؤدي إلى تمديد الحمض النووي التمهيدي على قالب الحمض النووي أحادي الجديلة في وجود ديوكسينوكليوتيد ثلاثي الفوسفات (dATP و dCTP و dGTP و dTTP) لتجميع تسلسل الحمض النووي التكميلي

سيؤدي التمسخ الحراري اللاحق للحمض النووي المزدوج الشريطة ، متبوعًا بتصلب نفس التسلسل التمهيدي إلى الحمض النووي المفرد الذي تقطعت به السبل ، إلى تخليق نسخ أخرى من الحمض النووي المستهدف.

● ينتج عن ثلاثين إلى 35 دورة متكررة متتالية أكثر من مليون نسخة (أمبليكون) من هدف الحمض النووي ، وهو ما يكفي للتصور المباشر عن طريق التألق فوق البنفسجي بعد تلطيخ بروميد الإيثيديوم ، دون الحاجة إلى استخدام تقنيات الكشف غير المباشر.

. يسمح تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) بتحليل الحمض النووي من أي مصدر خلوي يحتوي على نوى ، بالإضافة إلى الدم ، يمكن أن يشمل عينات أقل توغلاً مثل كشط الخد أو مواد أرشيفية مرضية. • من الممكن أيضًا البدء بكميات صغيرة من الحمض النووي مثل تلك الموجودة في خلية واحدة ، كما هو الحال في التشخيص الجيني السابق للانغراس.

• يجب توخي الحذر الشديد مع تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) ، نظرًا لأنه سيتم أيضًا تضخيم الحمض النووي من مصدر خارجي ملوث ، مثل الجلد المتقشر من عامل المختبر. يمكن أن يؤدي هذا إلى نتائج إيجابية خاطئة ما لم يتم استخدام دراسات التحكم المناسبة لاكتشاف مصدر الخطأ المحتمل هذا.

ميزة أخرى لتفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل هي سرعة دوران العينات لتحليلها. • استخدام بوليميراز DNA Taq المستقر للحرارة والمعزول من بكتيريا Thermophilus aquaticus ، والتي تنمو بشكل طبيعي في الينابيع الساخنة ، وتنتج منتجات PCR في غضون ساعات بدلاً من الأيام أو الأسابيع اللازمة لتقنيات استنساخ الحمض النووي داخل الخلايا.

لقد خفضت آلات PCR في الوقت الحقيقي هذا الوقت إلى أقل من ساعة واحدة ، ويتم استخدام تقنية الفلورسنت لمراقبة توليد منتجات PCR خلال كل دورة ، وبالتالي القضاء على الحاجة إلى الرحلان الكهربائي للهلام.

* استنساخ الحمض النووي بواسطة تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) ، على عكس التقنيات القائمة على الخلايا في الجسم الحي ، له عيب أنه يتطلب معرفة تسلسل النوكليوتيدات لجزء الحمض النووي المستهدف وأفضل استخدام لتضخيم شظايا الحمض النووي حتى 1 كيلوبايت ، على الرغم من أن تفاعل البوليميراز المتسلسل طويل المدى يسمح بتضخيم شظايا الحمض النووي الأكبر حجمًا حتى 20 30 كيلو بايت.

النشاف الجنوبي • النشاف الجنوبي ، الذي سمي على اسم إدوين ساوثرن الذي طور هذه التقنية ، يتضمن هضم الحمض النووي بواسطة إنزيم التقييد الذي يخضع بعد ذلك لرحلان كهربائي على هلام Agarose. • هذا يفصل الحمض النووي أو شظايا التقييد بواسطة.

يتم بعد ذلك تغيير طبيعة شظايا الحمض النووي الموجودة في الهلام بالقلويات ، مما يجعلها مفردة. يتم عمل نسخة “دائمة” من هذه الشظايا المفردة التي تقطعت بها السبل عن طريق نقلها إلى مرشح نيتروسليلوز الذي يربط الحمض النووي أحادي الجديلة ، ما يسمى بالطخة الجنوبية.

• يمكن تصور جزء معين من الحمض النووي محل الاهتمام من المجموعة الموجودة على المرشح عن طريق إضافة مسبار الحمض النووي 32P المسمى إشعاعيًا والذي سيتم تهجينه مع شظايا الحمض النووي المتماثلة في اللطخة الجنوبية ، والتي يمكن اكتشافها بعد ذلك عن طريق التصوير الشعاعي الذاتي.

 

 

اترك تعليقاً